凝血酶作为凝血机制中的关键酶，能直接作用于血液凝固过程的最后一步，促使血浆中的可溶性纤维蛋白原转变成不溶的纤维蛋白，使血液很快形成稳定的凝血块，并能促进血小板聚集和黏附，以进一步密封伤口并增强组织修复。此外，凝血酶还被证明是平滑肌和内皮细胞增殖的有效刺激因子，其在止血的同时或能促进细胞的有丝分裂，加速创伤愈合^［1］。重组人凝血酶是通过基因重组技术在体外生产的凝血酶，与人体内源性凝血酶的氨基酸序列完全一致，具备与天然凝血酶相同的功能。

临床前药代动力学研究采用¹²⁵I放射性示踪法，在大耳白兔创面模型中完成药代动力学研究（模拟肝创伤局部用药时该药在局部和可能被吸收入血的比率），在食蟹猴体内完成皮下注射和静脉注射的药代动力学研究，从而评估该药物的临床应用特性和可能风险。大耳白兔肝创伤后局部给药研究结果显示给药后药物主要集中在给药局部部位，使用后 1~24 h极少量药物（<0.52%）从肝损伤部位吸收入血，表明重组人凝血酶在局部用药时发生因药物进入血液从而导致不良反应的可能性很小。食蟹猴静脉注射药代动力学研究结果显示静脉注射后能迅速（5 min内）与血浆中的蛋白结合形成复合物，而后又迅速被清除。食蟹猴皮下注射药代动力学研究结果显示皮下注射生物利用度为（87.8±16.3）%。以上研究结果为国内获批上市的重组人凝血酶的临床前药代动力学结果，与国外已上市的重组人凝血酶产品发表的数据^［2］基本一致，提示两款产品的药代特征基本相似。考虑到重组人凝血酶单次局部给药时几乎无吸收入血，因此未进一步进行人体内的药代动力学研究。

重组人凝血酶开展了在酸性、碱性条件下稳定性研究，结果显示酸处理（pH=3.0）后敏感；碱处理（pH=10.0）稳定性研究包括了蛋白质含量、生物学活性、纯度、相关蛋白含量4个维度探索，结果提示碱性环境下应在4 h内使用。

重组人凝血酶1 000 IU/mL溶液开展了不同温度下的稳定性研究，结果显示40 ℃时重组人凝血酶溶液可以在10 min内生物学活性保持稳定且符合质量检测标准，≥50 ℃时样品活性开始显著下降。建议临床使用时在<40 ℃以下使用，在40 ℃时应在溶解后10 min内使用。

以单位时间内的喷雾体积作为评价喷雾压力剪切强度的替代指标，分别使用喷雾瓶和腔镜喷雾装置开展相关实验；结果显示两种喷雾装置的单位时间内的喷雾体积接近，喷雾压力剪切强度接近，且生物学活性均符合质量检测标准。喷雾压力剪切强度对重组人凝血酶的生物学活性无显著影响。

国内上市的重组人凝血酶进行过2项临床研究：（1）Ⅰ-Ⅱ期临床研究1项，共纳入83例患者，分3个部分评价了重组人凝血酶用于肝段切除术中毛细血管和小静脉渗血和出血治疗的安全性、耐受性，并初步探索有效性。第1部分为剂量递增耐受性Ⅰ期试验，第2、3部分为随机、单盲和空白平行对照Ⅱ期扩展试验，分别评价不同剂量组（1 000、2 000 IU/mL 重组人凝血酶和空白对照）单独使用及联合可吸收明胶海绵使用时的安全性和有效性；结果显示外用重组人凝血酶耐受性良好，不良反应与空白对照相当，未发生药物相关不良事件、导致提前退出的不良事件；1 000、2 000IU/mL重组人凝血酶的6 min止血成功率相当（90%左右）且明显高于空白对照（67%），并能减少术中出血量，重组人凝血酶单独使用时6 min内止血成功率均达到90%以上。确定1 000 IU/mL作为Ⅲ期推荐剂量。（2）Ⅲ期研究1项^［1］，该研究为国内上市重组人凝血酶的关键性注册临床研究，是一项多中心、分层随机、双盲、安慰剂对照临床研究（在中国33家研究中心开展），评价了重组人凝血酶对经外科常规止血后依然渗血的肝脏创面的止血疗效、安全性和免疫原性。期中分析时共348例患者接受随机并使用研究药物（凝血酶组232例，安慰剂组116例）。疗效数据显示可评价出血点6 min内的止血率在凝血酶组和安慰剂组分别为71.6%和44.0%（P<0.01），校正分层因素后止血率差为27.6%。凝血酶组和安慰剂组中位止血时间分别为240.5 s和NA（表示截至用药后观察6 min未达到）。分层Cox比例风险模型分析结果显示凝血酶组可评价出血点的止血成功的概率是安慰剂组的2.04倍（HR=2.04，95%CI为1.49~2.79），组间差异有统计学意义（P<0.01）。随着时间的延长，凝血酶组止血成功率较安慰剂组的优势逐渐扩大。安全性结果显示，在治疗期间与研究药物相关的不良事件中，凝血酶组为3例（1.3%），安慰剂组为4例（3.4%），未发生≥3级药物相关不良事件和药物相关死亡。免疫原性结果显示，受试者在使用重组人凝血酶后，无免疫增强抗药抗体发生，也无免疫诱导抗药抗体发生，中和抗体检测均呈阴性。

国外上市的重组人凝血酶（ZymoGenetics 公司的 Recothrom）共做了7项临床研究：（1）Ⅰ期研究1项^［3］，为剂量递增研究（共纳入9例患者），确定1 000 IU/mL为Ⅱ期研究的推荐剂量浓度。（2）Ⅱ期研究有2项：① 1项多中心、随机、双盲、安慰剂对照研究^［4］，评价了重组人凝血酶作为局部止血剂在4种不同的手术环境中的应用（动静脉移植物形成用于血液透析通路，大范围肝切除，外周动脉旁路手术和脊柱手术），共纳入130例患者，以1∶1随机分组；结果显示安慰剂组和重组人凝血酶组的不良事件、严重不良事件和治疗相关不良事件的总体发生率相似，未发生与重组人凝血酶相关的不良事件。研究期间，每组各有1例患者（安慰剂组2.4%，重组人凝血酶组1.2%）产生了重组人凝血酶特异性抗体，但这些抗体均不能中和天然人凝血酶，且与任何出血不良事件无关。重组人凝血酶加明胶海绵组与安慰剂加明胶海绵组止血时间的风险比为1.3，表明重组人凝血酶对止血有积极影响。②1项多中心、单臂、开放标签研究^［5］，评价了重组人凝血酶在接受烧伤皮肤移植的患者中的安全性、免疫原性和止血作用（共纳入72例患者），结果显示未发生与研究药物相关的不良事件。1例患者在基线时具有低滴度抗重组人凝血酶抗体（1.4%），治疗后抗体水平未增加，1例患者在治疗后产生抗重组人凝血酶抗体（1.6%），但检测到的抗重组人凝血酶抗体均不能中和天然人凝血酶。71例患者中有65例（91.5%）在应用重组人凝血酶后20 min内实现止血。（3）Ⅲ期研究1项，该研究为国外上市重组人凝血酶的关键性注册临床研究^［6］，是一项随机对照、双盲临床研究（在美国34个医疗中心开展），比较了重组人凝血酶和牛凝血酶在肝切除术、脊柱手术、外周动脉旁路移植术和透析通路手术中作为止血的有效性、安全性和免疫原性。该研究共纳入411例患者（重组人凝血酶组205例，牛凝血酶组206例），结果显示10 min内止血的发生率在治疗组之间是相当的（重组人凝血酶组为95.4%，牛凝血酶组为95.1%），且两种治疗方法在各种手术环境中均具有相似的止血疗效。两个治疗组之间安全性结果相似（包括手术死亡率、不良事件和实验室异常）。免疫原性结果显示重组人凝血酶组治疗后抗药抗体的阳性率为1.5%，显著低于牛凝血酶组的21.5%（P<0.01）。抗药抗体阳性的患者出血和血栓栓塞事件、超敏反应和活化部分凝血活酶时间延长的发生率在数值上均相较于抗药抗体阴性的患者有所增加。（4）Ⅲb期研究1项，为多中心、单臂、开放标签研究^［7］，目的是确定在有或无预先存在抗牛凝血酶抗体的患者中，重组人凝血酶的免疫原性是否存在差异。在具备完整免疫原性评估的200例患者中，31例（15.5%）基线时有抗牛凝血酶抗体，4例（2.0%）基线时有抗重组人凝血酶抗体，在使用重组人凝血酶后第29天再次进行抗体检测时，无患者出现抗重组人凝血酶抗体阳性（包括血清转化或≥10 倍滴度增加）。与基线时没有抗牛凝血酶抗体的患者相比，基线时即存在抗牛凝血酶抗体的患者年龄更大（P=0.04），既往接受过更多的手术（P<0.001）。（5）Ⅳ期研究2项：①开放标签、多中心、单臂研究1项^［8］，评估了既往接触过重组人凝血酶的成年患者再次暴露于重组人凝血酶的免疫原性和安全性（30例患者完成了研究）。该研究结果显示，无患者在第 29 天，即第2次暴露于重组人凝血酶后约1个月，抗重组人凝血酶抗体呈阳性。安全性方面所有不良事件和临床实验室异常都被认为与治疗药物无关。②开放标签、单臂研究1项^［9］，评估了重组人凝血酶在接受同步烧伤创面切除和皮肤移植的0~17岁儿科患者中的安全性和免疫原性，共计30例患者接受了重组人凝血酶治疗，28例患者完成了研究，27例患者完成了免疫原性检测（基线检测+术后第29天检测）。该研究结果显示，未发生与研究药物相关的不良事件，未发现抗重组人凝血酶抗体呈阳性的患者。

国内已上市的人血浆提取或动物血浆提取凝血酶均属于非高度提纯产品，执行标准均为《中华人民共和国药典标准》。《中华人民共和国药典（2020年版）》规定：猪或牛血提取的凝血酶产品，每毫克所含活性成分应≥10 IU；人血浆提取的凝血酶产品，每毫克所含活性成分应≥100 IU。重组人凝血酶的比活性标准为2 600~4 000 IU/mg（即每毫克所含活性成分为2 600~4 000 IU），相较于血浆提取产品在比活性上的巨大差异，反映出了重组人凝血酶产品在纯度方面的显著优势。血浆提取凝血酶产品中包含大量杂质蛋白，重组人凝血酶相较提取产品极大降低了免疫原性风险。

动物实验止血疗效量效关系的研究结果显示，在100、300、1 000 IU/mL剂量下，止血时间、出血量与药物浓度有很好的剂量依赖性。与原研药物Recothrom 1 000 IU/mL相比较，100 IU/mL（P<0.01）和300 IU/mL（P<0.05）的止血效果显著更弱。重组人凝血酶的临床使用剂量为1 000 IU/mL，与国际标准一致。在1 000 IU/mL 剂量下，重组人凝血酶与原研药物Recothrom止血作用相当，说明1 000 IU/mL的临床剂量将产生显著更强的止血疗效。人血浆提取凝血酶的说明书用法为用灭菌注射用水稀释成250 IU/mL，动物血提取凝血酶的说明书用法为用灭菌注射用水稀释成50~250 IU/mL，部分血浆提取凝血酶的说明书中明确指出复溶浓度>500 IU/mL时药物溶液将显浑浊。

既往国内上市的凝血酶产品均为血浆来源制品（动物血或人血浆），随着血浆来源的日益缺乏，血浆产品的生产成本日益升高，人血浆来源凝血酶处于短缺状态。同时，人血浆产品潜在的血源性疾病传播风险、动物血浆产品带来的免疫原性等问题极大限制了凝血酶的产量和应用。重组人凝血酶是通过基因重组技术在体外生产的人凝血酶，与人体内源性凝血酶的氨基酸序列完全一致；不仅具备与天然凝血酶相同的功能且纯度和比活性更高，还能更好地消除血浆来源产品带来的血源性疾病传播风险及免疫原性问题；其安全性及低免疫原性特征得到Ⅲ期临床研究验证^［1］，是具有更优生物安全特性的凝血酶产品。

手术创面的微小出血可分为肉眼明确可见的出血点和肉眼无法分辨出血点的渗血。凝血酶溶液具有良好的流动性特点，接触创面后可以有效地捕捉和覆盖创面出血点，起到止血并防止微小渗血的作用。此外，多项国内外研究均表明凝血酶止血的同时还能减轻炎症反应、减少术后引流量、加速创面愈合^{［10, 11, 12, 13］}。

患有增加血栓形成风险疾病的患者（例如心房颤动）、或经历了某些能够增加血栓形成风险的手术或医疗程序的患者（例如心脏瓣膜置换手术）需要执行长期抗栓治疗。此类患者在行大手术或大型侵入性操作时，围手术期抗栓治疗的管理非常重要^［14］，评估患者和手术相关的出血和血栓栓塞风险是围手术期抗血栓形成管理的基础^［15］；管理目标为最大限度地减少停用抗栓治疗后导致的血栓风险，并尽量减少术后大出血的风险。重组人凝血酶作为局部止血药，可以直接应用于出血部位，提供精确的止血效果，减少对全身抗栓治疗的干扰并降低全身性不良事件的风险；这对于维持患者的抗栓治疗效果和减少术后出血风险非常重要，相较于静脉应用的全身性止血产品在应对术中出渗血方面具有一定的优势。

他汀类药物使用人群广泛，是高脂血症、心脑血管疾病患者的常规用药，除特殊情况外，术前不会常规停用他汀类药物；因有多项研究表明^{［16, 17, 18, 19, 20］}，围手术期使用他汀类药物的患者，其心血管发病风险和死亡风险显著降低。他汀类药物可以下调组织因子水平，进而下调内源性凝血酶的生成^{［21, 22, 23, 24, 25, 26］}；因此围手术期服用他汀类药物的患者，术中需要执行局部止血时，建议根据创面情况必要时优选能够外源性补充凝血酶的局部止血产品；从而达到良好止血效果，尤其是创面大、血供丰富的脏器组织的手术。重组人凝血酶作为具有更优生物安全特性的凝血酶产品，在围手术期服用他汀类药物的患者的局部止血方面具有一定的优势。

重组人凝血酶可用于成人经标准外科止血技术（如缝合、结扎或电凝）控制出血无效或不可行，促进手术创面渗血或毛细血管和小静脉出血的止血。使用前每支用5 mL无菌生理盐水溶解成1 000 IU/mL的重组人凝血酶溶液，溶解后可直接喷洒在局部出血部位，或用医用可吸收性明胶海绵浸泡后覆盖于出血部位的表面。

凝血酶类局部止血药在中国上市已久，其除了具有止血的功能之外，还可以有效刺激平滑肌和内皮细胞的增殖，因此凝血酶在止血的同时还可以促进细胞的有丝分裂、加速创面的愈合。相比于其他局部止血材料，凝血酶具有“无残留”的特性，其流动性特点使其能更好地适应临床局部止血治疗中的复杂多变情况，为医生提供了更多的治疗可能性。重组人凝血酶的局部止血疗效得到了Ⅲ期临床试验验证，是具有更优生物安全性的一种凝血酶，推荐在合适的局部止血场景合理选用。

1.扁桃腺手术创面止血的应用^［28］：扁桃腺手术创面虽然不大，但是由于其位置特殊，填塞压迫的止血方法对凝血功能障碍和较大创面效果欠佳，而长期慢性炎症形成的纤维化，容易加重创面渗血。凝血酶溶液流动性强，用于采取剥离法切除的扁桃体手术创面，不仅能够快速提供外源性凝血酶加速可视创面出血点的止血，同时对于肉眼不可见的微小渗血点也能很好的覆盖。

2.前列腺摘除术中止血的应用^［29］：前列腺的主要供血动脉为膀胱下动脉，该动脉在膀胱两侧面经膀胱颈与前列腺交界处分前列腺动脉的前侧支及后侧支；前侧支动脉供应前列腺被膜，后侧支动脉供应前列腺腺体。为了减少术中出血，术前一般会在5、7点两侧贯穿缝扎前列腺动脉，以阻断前列腺的供血来源。然而在临床实践中，即使在5、7点缝扎止血或腺窝边缘作一圈缝合，有的腺窝内仍常有大量出血，这是因为腺窝壁仍有开放的小动脉、静脉无法缝合。临床上可用浸润重组人凝血酶溶液的纱布对髂窝出血部位进行填塞止血，凝血酶溶液接触创面后可直接促使纤维蛋白原变成纤维蛋白而加速血液凝固，进而达到良好的止血效果。

3.前置胎盘剖宫产术中止血的应用^［30］：前置胎盘由于胎盘面积大且附着部位低而不易迅速排出，加之子宫下段肌层菲薄，收缩止血功能差，宫缩剂往往不能奏效；前置胎盘若处理不当，可危及母儿生命或造成不必要的并发症。剖宫产是处理前置胎盘的急救措施与适时分娩的主要手段，但术中胎盘剥离面出血是一个关键性问题。既往报道表明肾上腺素加凝血酶治疗前置胎盘剖宫产术中胎盘剥离面大出血有良好的止血效果，值得临床尝试与推广应用。

4.肺癌根治术中止血的应用^［31］：肺癌患者行解剖性肺切除并系统性淋巴结清扫术后，因纵隔创面较大，以及胸腔内负压的影响，导致其术后胸腔内出血风险较高；而胸腔内出血轻者可造成胸腔引流量增加、带管时间延长、血浆蛋白丢失，重者可导致失血性休克，甚至可危及患者生命。因此术中仔细止血并合理应用止血药物以降低术后出血风险、减少术后胸腔内血性渗出具有重要意义。既往临床研究数据显示，肺癌根治术中在胸腔内喷洒凝血酶具有良好的止血效果，且对全身凝血功能无明显影响。

5.脊柱结核病灶清除术中止血的应用^［32］：脊柱结核患者多采用后路病灶清除植骨融合内固定的手术方式，具有侵入性及较高的复杂性，因为需要充分打开后路的椎板清除病灶，创伤范围较大，渗血往往较重，为了使此类患者术后达到快速康复的目的，需要减少手术中及手术后出血量，减少总引流量。有研究表明：凝血酶的使用可以使接受此类术式的患者手术创面的渗出减少，并起到减少引流的作用。需要注意的是：凝血酶必须与出血创面直接接触才能起作用，使用时可以将凝血酶以干粉或溶液形式涂抹于手术处或渗血面，或与明胶海绵共同填压于出血处^［33］，可以对术中急性渗血起到迅速有效的止血效果。

国内上市重组人凝血酶在两项随机对照临床试验（分别为Ⅲ期临床试验 ZGrhT002 和Ⅰ-Ⅱ期临床试验 ZGrhT001）中评价了安全性，313例使用重组人凝血酶的患者中仅3例发生了与研究药物相关的不良事件，均为1~2级（以临床观察和对症处理为主，且已解决或恢复），未发生≥3级不良事件，未发生导致过敏的药物相关不良事件。

局部止血药物，严禁注射使用，仅用于出血组织表面，不可用于治疗大出血或动脉快速出血。